SSD: MED/24- Urologia
Responsabile della ricerca: Carlo Terrone
Finanziamento: FRA 2018
Descrizione
Lo scopo dello studio è: caratterizzare genomicamente le Treg CD8 + intratumorali nel carcinoma della vescica. Gli studi saranno eseguiti sia su cellule purificate da campioni di sangue e campioni tumorali da pazienti con carcinoma vescicale, sia da campioni di sangue di donatori sani.
Campione: 50 pazienti in due anni, 10 donatori sani.
Un campione bioptico (TURB) ed un campione di sangue (30 ml) per paziente; un campione di sangue (30 ml) verrà raccolto dai donatori sani. I
campioni saranno trattati per purificare i linfociti ed eseguire la analisi dell'array genico.
Verranno analizzati quattro sottogruppi di cellule:
- CD8 + CD28- CD127loCD39 + Treg da campioni tumorali;
- CD8 + CD28- CD127loCD39 + Treg da sangue periferico;
- CD8 + CD28- CD127loCD39 + Treg generati in vitro da soggetti sani;
- CD8 + CD28- T cellule dal sangue periferico di soggetti sani.
L'RNA totale dai diversi campioni sarà estratto usando il kit RNeasy Micro Kit (QIAGEN) e il trattamento con DNasi I, per eliminare la possibile contaminazione del DNA genomico. I microarray verranno eseguiti utilizzando il CHIP (Genetic Microarrays CHIP) di Agilent 60- mer per l'intero genoma umano (Agilent Technologies, USA). In breve, gli RNA saranno controllati per la purezza da Bioanalyzer (Agilent Technologies, USA) e quindi saranno etichettati e ibridati con il CHIP secondo protocolli standard.
Risultati attesi:
Il progetto sperimentale finora descritto è stato redatto secondo una strategia di “Drug Discovery” e consentirà la caratterizzazione genomica delle celluleCD8 + Treg intratumorali. Ciò potrebbe rivelare nuovi meccanismi biologici relativi ai percorsi di attivazione molecolare, funzione e regolazione di questo sottoinsieme di cellule.
La comprensione di tali passaggi aprirebbe le porte alla realizzazione di molecole capaci di sostenere un intervento immunitario terapeutico nei pazienti affetti da carcinoma della vescica, volto a inibire la funzione Treg CD8 +.